由FHV-1、FCV、衣原体因起的上呼吸道感染，一般在口咽、舌、鼻腔、结膜中采样，对于FHV-1引发的上呼吸道疾病，不同采样点的检出率没有太大差异。FCV为病原体时，推荐以咽、舌作为取样点，衣原体更易在结膜中检测到。当只采一份样本，推荐以咽作为取样点。
病毒性上呼吸道感染的临床表现为出现眼鼻分泌物、打喷嚏，有些猫出现口腔溃疡、发烧。严重时表现为结膜炎、眼分泌物变黏脓等。对于上呼吸道和眼部症状，疱疹病毒感染相对杯状病毒感染可能表现更为严重。杯状病毒更多表现为口舌溃疡。
衣原体感染：衣原体主要引起眼睛感染，上呼吸道感染较轻，出现温和的鼻炎和喷嚏。若无眼睛症状只有上呼吸道症状极大可能不是衣原体感染。
Fig 5. FCV感染的症状：眼鼻分泌物（A）；
血管炎引起的皮肤溃烂（B、D）；外周水肿（C）
Fig 6. FCV引起的舌溃疡
注：并非所有FCV感染的猫都会出现舌溃疡，舌溃疡也不是FCV感染特有症状。
Fig 7. 猫衣原体感染引起的化脓性结膜炎
不同的病因可能存在交叉临床表现。临床上出现眼鼻分泌物、打喷嚏为主要症状的疾病除了病毒、细菌引起的上呼吸道感染外，还可能是其他情况。鉴别诊断如下：
（1）过敏性疾病(吸入性过敏反应)：季节性发作，需要做微生物培养及过敏原检测确诊。
（2）老年猫齿科疾病：除表现为上呼吸道症状外，颜面部肿 胀、牙结石、牙周炎、牙齿松动、口臭流涎，确诊需要口腔检查和牙齿X线检查。
由FCV、FHV引起的病毒性上呼吸道感染，可以结合胶体金检测、抗体检测、RT-PCR等方法进行判断。由细菌引起的上呼吸道感染可以结合PCR、细菌培养等方法进行鉴定。
1 胶体金检测卡
目前市面上有很多FCV、FHV抗原快速检测卡，依可立康的胶体金快速检测卡针对临床初期筛查准确率高、灵敏度高且成本低、操作简单快速。10mins出结果，非常适合现场快速检测。
2 PCR
在判断病原体的方法上，PCR是比较灵敏和方便的方法，适用于各类病原体，尤其针对某些不能分离或难以分离培养的微生物。但也有可能出现假阳性的情况，因为PCR可能会检测到粘膜表面已经死亡的生物，不能反映真实感染情况，所以要结合临床症状作诊断。
3 病毒分离（实验室用，供参考）
FCV可以在KF81、CRFK等猫的传代细胞上进行培养，并引起细胞病变。将处理后的样本接种于细胞后，若存在FCV，48h后可导致病变，病变细胞变圆、核固缩，聚缩成葡萄状脱落，若盲传3~5代，无病变细胞可视为阴性。
FHV的分离：FHV可以在单层F81细胞中生长，将采集到样品接种于F81单层细胞中培养，吸附1~2h，弃液体，加入病毒维持液（DMEM+2%FBS）于37℃培养4-5d，观察细胞变化。若无变化取上清传代培养，至第三代仍无变化时判为阴性。若有病变；细胞肿胀变圆、缩聚成葡萄串状、后呈散鱼籽样，最后脱落成碎片状，可以初步鉴定为阳性。
4 细菌培养（实验室用，供参考）
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菌种 |
培养基 |
形态学现象 |
革兰氏染色 |
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金黄色葡萄球菌 |
血琼脂平板、Baird-parker平板 |
血平板上菌落呈金黄色（有时白色），表面光滑，周围有溶血圈。 Baird-parker平板上为圆形、光滑、颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围有浑浊带、外层有透明圈。 血浆凝固酶试验：挑取平板上的单菌落接种到BHI肉汤中，36℃恒温培养18-36h。取新鲜配置血浆0.5ml与BHI培养物0.5ml分充分混匀，置36±1°C培养，每隔半小时观察一次，连续观察6小时，如出现凝固，或大部分凝固，判定为阳性。 |
阳性、紫色 |
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绿脓杆菌 |
普通琼脂平板、普通肉汤培养基、三糖铁琼脂、血琼脂平板 |
普通平板：27℃18-24h，培养基呈黄绿色，菌落圆形、表面光滑、边缘整齐，气味难闻； 普通肉汤培养基：菌液浑浊，液面处有绿色色素； 三糖铁琼脂：37℃培养18-24h，不产生硫化氢，底部不变黄； 血液琼脂：菌落圆润，边缘不平整，蓝绿色金属光泽，菌落周围可能出现轻度溶血环。 |
阴性、红色 |
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波氏杆菌属 |
血琼脂平板、普通营养琼脂平皿、麦康凯琼脂平皿 |
血液琼脂平面：取样接种在血液平面上37℃培养48h，菌落周围出现β溶血。 麦康凯琼脂：37℃培养24h出现圆形凸起、光滑、边缘整齐、黄褐色、中等大小菌落。 |
阴性，小杆菌，两端钝 |
5 衣原体的诊断
衣原体的检测可以使用免疫荧光、免疫过氧化氢酶染色、Giemsa染色法。这里介绍一下Giemsa染色法：
刮取眼结膜上皮细胞进行涂片，用Giemsa染色，显微镜检查，如在细胞内发现嗜碱性核内包涵体细胞可以诊断为衣原体感染。出现严重呼吸困难症状 ,应拍胸部 X线片 ,判定患猫是否发生肺部和支气管感染。
从上面我们可以看到，一般实验室用的方法较准确但是通常形式较多、耗时较久，可能不太适合医院进行临床诊断。胶体金检测卡相对快速便捷，使用度较高，尤其是在病毒的检测上具有较高的准确性。另外PCR技术也较为成熟，依可立康也在不断完善产品体系，未来将推出PCR技术，减少送检带来的不便。PCR可检测病原体类别更多，对于准确检测有着比较好的结果。
References:
1. Binns S H, Dawson S, Speakman A J, et al. A study of feline upper respiratory tract disease with reference to prevalence and risk factors for infection with feline calicivirus and feline herpesvirus[J]. Journal of Feline Medicine & Surgery, 2000, 2(3):123-133.
2. Cohn L A. Feline respiratory disease complex.[J]. Veterinary Clinics of North America Small Animal Practice, 2011, 41(6):1273-1289.
3. Di M B, Di F C, Meridiani I, et al. Etiological investigation of multiple respiratory infections in cats.[J]. New Microbiologica, 2007, 30(4):455.
4. Helps C R, Lait P, Damhuis A, et al. Factors associated with upper respiratory tract disease caused by feline herpesvirus, feline calicivirus, Chlamydophila felis and Bordetella bronchiseptica in cats: experience from 218 European catteries.[J]. Veterinary Record, 2005, 156(21):669-673.
5. Litster A, Wu C C, Leutenegger C M. Detection of feline upper respiratory tract disease pathogens using a commercially available real-time PCR test.[J]. Veterinary Journal, 2015, 206(2):149-153.
6. Schulz C, Hartmann K, Mueller R S, et al. Sampling sites for detection of feline herpesvirus-1, feline calicivirus and Chlamydia felis in cats with feline upper respiratory tract disease[J]. Journal of Feline Medicine & Surgery, 2015, 17(12):1012.
